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大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
BS-3204 大鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒
一、試劑盒簡介
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)，用于定量檢測大鼠血清、血漿或組織勻漿樣本中的組蛋白H2b(histon-H2b)含量。
二、試劑盒組成
預(yù)包被抗體的96孔微孔板
標(biāo)準(zhǔn)品(不同濃度梯度)
辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體
20×洗滌緩沖液
TMB顯色底物
終止液
封板膜
說明書
三、儲(chǔ)存條件
未開封試劑盒：2-8℃避光保存，有效期6個(gè)月
已開封試劑盒：
標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體：-20℃保存
微孔板：干燥劑密封后-20℃保存
其他組分：2-8℃保存
使用前所有試劑需平衡至室溫(20-25℃)
四、樣本處理
1. 血清樣本
采集后室溫靜置10-20分鐘
2000-3000rpm離心20分鐘
小心吸取上清，避免溶血
如有沉淀需再次離心
2. 血漿樣本
使用EDTA或肝素抗凝
混合后離心條件同血清
避免使用疊氮鈉作為防腐劑
3. 組織樣本
稱取組織重量后加入PBS(pH7.4)
液氮速凍后研磨勻漿
離心取上清(建議1:3-1:5稀釋)
五、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 試劑準(zhǔn)備
洗滌液配制：將20×濃縮液用蒸餾水按1:19稀釋(1份濃縮液+19份水)
2. 加樣
取出平衡后的微孔板，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔
標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品
樣本孔：加入50μL待測樣本
空白孔：不加任何試劑
3. 溫育
每孔加入100μL HRP標(biāo)記檢測抗體
封板膜密封，37℃恒溫箱溫育60分鐘
4. 洗滌
棄去孔內(nèi)液體，吸水紙拍干
每孔加入350μL洗滌液，靜置1分鐘
重復(fù)洗滌5次(手工或洗板機(jī)操作)
5. 顯色
每孔加入90μL TMB底物，37℃避光顯色15-20分鐘
加入50μL終止液終止反應(yīng)
6. 測定
450nm波長測定各孔OD值
空白孔調(diào)零
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
樣品OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算濃度
若樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)范圍，需用樣本稀釋液稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)
七、注意事項(xiàng)
所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，廢棄物按傳染性物質(zhì)處理
不同批號(hào)試劑不可混用
顯色液需避光保存
封板膜一次性使用
實(shí)驗(yàn)前需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本稀釋倍數(shù)
建議設(shè)置復(fù)孔檢測
八、性能指標(biāo)
靈敏度：≤0.1 ng/mL
檢測范圍：0.3-20 ng/mL
批內(nèi)變異系數(shù)：<9%
批間變異系數(shù)：<11%
回收率：85-115%
九、常見問題處理
高背景：檢查洗滌是否充分，底物是否污染
低信號(hào)：確認(rèn)抗體活性，檢查溫育時(shí)間
異常值：重復(fù)檢測，確認(rèn)樣本處理過程
(注：本說明書為通用版本，具體操作請以實(shí)際試劑盒附帶說明書為準(zhǔn))
注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師或品牌商。
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