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BS-2331 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠樣本中的GR蛋白濃度。將抗GR單抗包被于微孔板，加入樣本后形成抗原-抗體復(fù)合物，再與HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合，最終通過(guò)TMB底物顯色反應(yīng)定量分析。
二、試劑盒組成
組分規(guī)格保存條件
預(yù)包被微孔板96T/48T2-8℃避光
GR標(biāo)準(zhǔn)品6濃度梯度-20℃凍存
HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體1瓶2-8℃避光
TMB底物液A/B各1瓶2-8℃避光
注：不同批號(hào)試劑嚴(yán)禁混用
三、關(guān)鍵操作步驟
樣本處理
血清/血漿：離心后取上清，避免溶血
組織勻漿：按1:9比例加入裂解液，冰上超聲破碎
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用200μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，靜置10分鐘后上下顛倒混勻15次
梯度稀釋時(shí)每次稀釋后需短暫離心，避免氣泡產(chǎn)生
孵育條件
37℃溫育90分鐘(每步加樣后輕拍板邊緣混勻)
洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用，每次浸泡時(shí)間≤30秒
四、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
有效性驗(yàn)證
標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.99，最高濃度OD值在2.0-2.4之間
復(fù)孔變異系數(shù)(CV%)應(yīng)<15%
濃度計(jì)算
樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線20%-80%范圍內(nèi)時(shí)可直接計(jì)算
超出范圍需重新稀釋
五、常見(jiàn)問(wèn)題解決方案
現(xiàn)象可能原因處理措施
全板不顯色漏加HRP酶標(biāo)抗體檢查加樣順序并重做
背景值過(guò)高洗滌不充分增加洗滌次數(shù)至5次
標(biāo)準(zhǔn)曲線非線性標(biāo)準(zhǔn)品溶解不均復(fù)溶后延長(zhǎng)離心時(shí)間
注意：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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