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影響ELISA試劑盒測(cè)定成果的原因和解決辦法，有哪些?
ELISA是什么?
ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡(jiǎn)稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù) 。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上，再加入一級(jí)檢測(cè)抗體(primarydetection Ab)，形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了，即可用來直接測(cè)定抗原的量，若無，則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來測(cè)定抗原的量。測(cè)定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate)，作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。
ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定，具有靈敏度高，操作簡(jiǎn)略等優(yōu)點(diǎn)，但是在詳細(xì)實(shí)驗(yàn)過程中影響要素較多，而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反響外，有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤成果(即假陽性或假陰性成果)。
影響ELISA測(cè)定錯(cuò)誤成果的原因主要有：
①標(biāo)本要素;
②試劑要素;
③操作要素。
一、類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號(hào)二抗的FC段直接結(jié)合，然后導(dǎo)致假陽性。
解決辦法:
1.用F(ab)2替代完好的IgG;
2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃，10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);
3.檢測(cè)抗原時(shí)，能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
二、補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號(hào)二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來，然后形成假陽性。
解決辦法:
1.用EDTA稀釋標(biāo)本;
2.用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
三、嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能形成假陽性。
解決辦法:
可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig(s)，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
四、嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定成果。
解決辦法:
測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
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