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本生快訊：Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的技巧及注意事項(xiàng)
在操作elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)前，不少老師會(huì)找尋很多的相關(guān)實(shí)驗(yàn)資料，網(wǎng)上的資料一大堆，然而真正所能夠需要用到的技巧和注意也就那幾條，熟練的了解并掌握之后再應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)中就會(huì)簡(jiǎn)單的多。
一、加樣的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，個(gè)孔與一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間控制 在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
二、孵育的三條必知
1.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo) 板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā);
2.洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);
3.同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
三、ELISA洗滌小技巧
洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直 接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響*后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
四、反應(yīng)時(shí)間的控制
加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔 10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
五、操作說(shuō)明
1.封板膜只做一次性使用。
2.標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高時(shí)先將樣本稀釋一定倍數(shù)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以稀釋倍數(shù)。
3.各步加樣均使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其正確性，一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)(標(biāo)本數(shù)目多的時(shí)候，上海研域推薦使用排槍加樣)。
4.液體標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，-80℃不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月;標(biāo)本溶血會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
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